HepG2

Abstract(#br)Animal cells are generally cryopreserved in cryovials in a cell suspension state containing 5%–10% v/v dimethyl sulfoxide (DMSO) used as a cryoprotective agent. However, cryopreservation of cells in an attached state has not been intensively studied, and the effective freezing solution remains unknown. Here we determined the suitable DMSO concentration for the cryopreservation of human hepatoma HepG2 cells attached to glass and polydimethylsiloxane (PDMS) matrices coated with poly- l -lysine.

在肝组织工程中，将肝细胞与典型的非实质性肝细胞共培养形成细胞集落，可以模拟体内微环境，促进细胞生物学功能。采用模块化组装方法，可将内皮化的肝细胞集合体进行灌注培养，从而可构建大规模的肝组织。由于紧密堆积的聚集体容易相互融合并阻碍灌注流，本研究引入了一种松散堆积模式，利用透氧聚二甲基硅氧烷( PDMS )基微阱装置，通过共培养肝癌( HepG2 )细胞、瑞士3T3细胞和人脐静脉内皮细胞( HUVECs )，获得高密度的内皮细胞聚集体作为肝组织元素，然后将共培养的聚集体在PDMS生物反应器中进行灌注培养10 d。为了维持合适的间质空间以稳定灌注，采用可降解聚乳酸( PLLA )支架纤维与聚集体混合，形成松散的填充模式。在微井共培养中，瑞士3T3细胞对肝细胞聚集体的形成有显著的贡献。HUVECs在聚集物中形成外周分布，供内皮化。在灌流培养中，与纯HepG2聚集体相比，HepG2 / Swiss 3T3 / HUVECs共培养聚集体表现出更高的细胞增殖和肝脏特异性功能表达(即葡萄糖消耗和白蛋白分泌)。在松装模式下，共培养聚集体表现出细胞迁移和与纤维粘连的特征性组织学形态。将HepG2、Swiss 3T3和HUVECs共培养，观察到Swiss 3T3细胞有利于内皮细胞聚集的形成。松散的聚集体使长期灌注培养具有高活性和生物学功能。